
BAC文庫構建的技術支持:
材料
緩沖液和溶液
- 堿裂解液I , 4°C 50 mM 葡萄糖 25 mM Tris-Cl (pH 8.0) 10 mM EDTA (pH 8.0) 配制堿裂解液I 約100ml,滅菌,保存在四度。
- 堿裂解液II,新鮮配置,室溫保存 0.2 N NaOH (從10N的NaOH新鮮制備) 1% (w/v) SDS 堿裂解液II應該新鮮配制,室溫保存。
- 堿裂解液III, 4°C 5M 醋酸鉀,60ml 冰醋酸,11.5ml SDW,28.5ml
- 酒精 - 70%酒精 - 異丙醇 - 酚:氯仿(1:1, v/v) - 醋酸鈉 (3M,pH5.2) - STE,4°C 10 mM Tris-Cl (pH 8.0) 0.1 M NaCl 1 mM EDTA (pH 8.0)
- TE (pH 8.0) 10 mM Tris-Cl (pH 8.0) 10 mM EDTA (pH 8.0)
載體與菌株 BAC轉化的大腸桿菌
培養基和抗生素 含12.5μg/ml氯霉素的LB平板和液體培養基
酶和緩沖液 溶菌酶 RNaseA,不含DNase 限制性內切酶和相應緩沖液
核苷酸/寡核苷酸 用于脈沖場凝膠電泳(pulsed-field gel electrophoresis)的DNA標準參照物
凝膠/點樣緩沖液 脈沖場凝膠電泳(Pulsed-field gels,或者0.5%瓊脂糖凝膠)
離心機/轉頭/離心管 其他 37攝氏度搖床

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